Bendroji mikrobiologija

Visų sterilių produktų, pagamintų pagal GMP, sterilumas privalo būti testuojamas nuolat. Tačiau ne visi sterilumo testavimo būdai yra lygiaverčiai. Kokybė, patogumas ir tinkamumas gali labai skirtis, įtakodami rezultatų patikimumą. Gauti klaidingai neigiami rezultatai gali būti susiję su užterštų produktų išleidimu bei gali turėti rimtų pasekmių tiek pacientams, tiek gamintojams. Kita vertus, kryžminis užterštumas ir klaidingai teigiami rezultatai reikštų ilgus ir brangius tyrimus, taip pat kaip ir produkto užlaikymą arba atmetimą. Merck siūlo patikimą sprendimą sterilumo nustatymui: uždarą membraninio filtravimo sistemą ir platų asortimentą mitybinių terpių bei buferių, tinkančių visiems sterilumo nustatymo tyrimams.

Mikrobiologinio užterštumo nustatymas skirtas gyvybingų mikroorganizmų, kurie randami žaliavose arba galutiniame produkte arba aplinkoje, aptikimui. Testai paparastai atliekami dviem etapais. Pirmajame kiekybiniame (mikroorganizmų skaičiavimo) etape nustatomas bendras mikroorganizmų kiekis. Antrajame, kokybiniame (mikroorganizmų identifikavimo) etape nustatomas konkrečių mikroorganizmų buvimas ar nebuvimas. Merck siūlo įrangą ir priemones, tokius kaip: membraninio filtravimo moduliai, piltuvėliai, vakuuminiai siurbliai, membraniniai filtrai, filtrų dispenseriai, oro siurbliukai, mitybinės terpės, reagentai ir kt. Taip pat siūlo ir greitosios mikrobiologijos sprendimus.

Merck jau daugybę metų gamina aukštos kokybės mitybines terpes, skirtas farmacijos, kosmetikos, maisto ir gėrimų pramonėms. Šioms pramonės šakoms skirtos mitybinės terpės yra: dehidratuotos (granuliuotos), paruoštos naudoti (skystos, agarizuotos). Taip pat tiekia ir terpių gaminimo komponentus. Visi produktai atitinka aukščiausius kokybės reikalavimus, turi kokybės sertifikatus bei yra saugūs vartotojams.

PyroDetect yra naujausia pirogenų nustatymo sistema, paremta monocitų aktyvavimo tyrimu (MAT), aprašytu Europos farmakopėjoje (EP skyrius 2.6.30) 2010 m. Naudodama organizmo įgimtą imuninę gynybos reakciją, PyroDetect sistema imituoja žmogaus karščiavimo reakciją geriau nei bet kurio gyvūno pirogenų testas. Mėginyje esantys pirogenai aktyvuoja šaldytame žmogaus kraujyje esančius monocitus, ko pasekoje susidaro citokinai, kurie nustatomi ELISA būdu, naudojant specifinius antikūnus ir fermentines kolorimetrines reakcijas. Monocitų aktyvavimo testas paremtas šaldyto kraujo ir interleukino-1β reakcija. Trys pagrindiniai testo su PyroDetect sistema nustatymo etapai: šaldyto (arba šviežio) kraujo inkubavimas, IL-1β ELISA tyrimas ir duomenų analizė. Tap pat šiai grupei priklauso ir PyroMAT sistema, tik ji paremta monoklonine ląstelių linija ir interliaukino IL-6 reakcija į pirogenus. Visa sistema apima endotoksinus, pirogenus ir ne-endotoksinius pirogenus.

ACC yra viena didžiausių gamintojų pasaulyje, tiekiančių rinkai produktus, skirtus gramneigiamų bakterijų endotoksinų ir (1→3)-ß-D-gliukanų kiekybiniam nustatymui. Šiuos produktus naudoja pirmaujančios pasaulyje farmacijos ir medicinos prietaisų bendrovės, siekiančios užtikrinti jų gaminamų parenterinių vaistų, biologinių produktų ir medicinos prietaisų saugumą. Taikymo sritys: farmacinių injekcinių preparatų testavimas, žaliavos bei proceso kontrolė, biologinių preparatų kontrolė, dializės vandens testavimas ir kt. 

Limulus Amebocyte Lysate (LAL) testais galima nustatyti ir kiekybiškai įvertinti gramneigiamų bakterijų išorinės membranos išskirtus endotoksinus. Pagrindinis LAL reagentų komponentas, naudojamas šiuose testuose yra baltymas, dalyvaujantis endotoksinų inicijuoto kraujo krešėjimo mechanizme, kuris gaunamas iš Atlantinio kardauodegio (Limulus polyphemus) amebocitų lizato ekstrakto. LAL testai yra aprašyti visose pagrindinėse farmakopėjose, JAV, Europos bei Japonijos farmakopėjoje.

Chromogeninis (spalvinis) metodas. LAL reagentas turi atitinkamą sintetinį substratą, kuriam sureagavus su endotoksinų aktyvuotu baltymu atsiranda geltona spalva. Testas yra skaitomas mikroplokštelių skaitytuvu prie 405 nm bangos ilgio. Maksimalus jautrumas 0,001 EV/ml.

Turbidimetrinis (drumstumo) metodas. Kinetinis metodas, paremtas drumstumo atsiradimu, lizatą paveikus endotoksinais. Drumstumo optinis tankis matuojamas inkubuojančiu mikroplokštelių skaitytuvu arba inkubuojančiu mėgintuvėlių skaitytuvu. Testo jautrumas – 0,001 EV/ml.

Gel-clot (gelio gumulo) metodas. LAL reagentas, paveiktas endotoksinais, suformuoja gelius. Tai pats paprasčiausias metodas. Rezultatai vertinami apverčiant mėgintuvėlį. Maksimalus jautrumas 0,03 EV/ml. Pigiausias metodas – nereikalingas optinis skaitytuvas. Tinka neskaidriems bei spalvotiems pavyzdžiams, suspensijoms.