Mėginių paruošimas

Kai funkciniams arba struktūriniams tyrimams reikalingi išvalyti baltymai, pirmas žingsnis yra suardyti ląsteles ir išskirti reikiamas baltymų frakcijas. Šis žingsnis yra labai svarbus, nes perdirbimo metodai, kuriuose taikomas mechaninis, cheminis ar apdorojimo fermentais metodai, gali paveikti reikalingą baltymų vientisumą ir aktyvumą, arba kitaip sukelti baltymų degradaciją. Merck siūlo visą spektrą reagentų ir fermentų, skirtų ląstelių suardymui ir baltymų išskyrimui.

Afininis gryninimas pagrįstas specifine sąveika, kai reikiama molekulė veikiama imobilizuotu ligandu. Merck siūlo daugybę priemonių afininiam rekombinantinių baltymų gryninimui, antikūnų gryninimui, nukleino rūgščių gryninimui, baltymas-baltymas sąveikos tyrimams ir albuminų/IgG išskyrimui iš kraujo serumo ar plazmos. Baltymų išgryninimą atliksite itin lengvai ir greitai, naudodami PureProteome ™ magnetinių dalelių sistemas, kurios pasižymi mažu kiekiu nespecifinių ryšių ir minimaliais mėginio nuostoliais. Įprasti baltymų gryninimo metodai reikalauja smulkių dalelių centrifugavimo, po kurio netenkama dalis mėginio. Magnetinės dalelės yra izoliuotos magnetinėje būsenoje, leidžiančioje visišką buferio atskyrimą, neprarandant mėginio.

Ruošiant baltymų mėginį downstream analizei, pavyzdžiui aktyvumo arba struktūriniams tyrimams, paskutiniai žingsniai yra užtikrinti, kad baltymas būtų savo pirminėje būsenoje, tirpioje formoje, ištirpintas pasirinktame buferyje bei atitinkamos koncentracijos. Merck membraninės technologijos, įskaitant tangentinio srauto filtravimą (TFF), pagrįstos atskyrimu, leidžia greitai ir lengvai atlikti baltymų koncentravimą, nudruskinimą ir buferio pakeitimą. Tam, kad atlikti atkuriamuosius baltymų tyrimus, jums reikia išgryninti baltymus taip, kad jie nedenatūruotų, neprarastų savo fermentinio aktyvumo bei kitų būtinų funkcijų. Mes siūlome keletą greitų ir paprastų filtravimo būdų, kurių dėka baltymų koncentravimas ir suskirstymas frakcijomis taps lengvesnis.

Sudėtingų ir jautrių baltymų mėginių greitai ir švelniai dializei naudojamas D-Tube™ dializatorius. D-Tube™ dializatorius yra su dvigubomis membranomis, todėl mėginį galima paskirstyti dideliu plotu bei atlikti dializę vos per 2-5 val. Diafiltravimui naudojami Amicon® Ultra išcentriniai įrenginiai. Amicon® Ultra idealiai tinka druskų, cukrų, nukleotidų ir tirpiklių (ne vandens pagrindu), taip pat kitų mažos molekulinės masės medžiagų pašalinimui.